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腰椎穿刺部位首選第4節和第5節腰椎間的椎間隙，此外還可以選第3節和第4節腰椎間隙，或者第5節腰椎和骶椎之間的椎間隙。腰椎穿刺是臨床中經常用到的技術，腰椎總共分為5節，從上到下分別是第1、2、3、4、5節，下面是骶骨，無色透明的是椎間盤，后方是神經，骨頭和骨頭間是椎板間隙。腰椎穿刺是放入一根針，從椎板間隙一直穿到椎管，將腦脊液抽出并做化驗。常用的位置是第4和第5節腰椎之間的椎板間隙，因為此處是馬尾結構，不易受到損傷，比較安全。如果在此處穿刺有困難，通常會向上挪一個節段，即在腰3、4椎間隙進行穿刺。如果仍有問題，可再向上一個節段。但人體圓錐有時會位于腰2椎體后方，所以會存在風險。