【摘要】　目的　研究粘附分子整合素α5β1在膽囊腺癌中的表達及其與膽囊腺癌分化、侵襲轉移和預后的關系。方法　應用免疫組織化學方法對57例膽囊腺癌石蠟包埋標本進行整合素α5β1半定量檢測。結果　有41例(71.9%)膽囊腺癌組織整合素α5β1表達減弱或消失，高分化癌的整合素α5 β1陽性率明顯高于低分化癌(P＜0.05)。整合素α5β1陽性率在膽囊癌伴淋巴結轉移組低于淋巴結陰性組(P＜0.05)。整合素α5β1表達陽性者2年生存率(32.5%)顯著高于表達陰性者(11.3%，P＜0.05)。結論　整合素α5β1表達與腫瘤細胞的分化程度、淋巴結轉移呈負相關，整合素α5β1表達與患者預后相關，可作為判斷膽囊癌患者預后的生物學指標。

　　Expression of integrin α5 β1 in adenocarcinoma of gallbladder and its clinical implication

WANG Lu*, CAI Duan, XU zude, et al.

　　（*Department of General Surgery, Huashan Hospital,

　　shanghai Medical University, Shanghai 200040,China）

　　【Abstract】 ObjectiveTo investigate the integrin α5 β1 expression in adenocarcinoma of gallbladder and its relation with tumor differentiation, invasion, metastasis and prognosis.Methods The integrin α5 β1 expression was detected in 57 cases of gallbladder adenocarcinoma by using immunohistochemistry technique (PAP method) and 37 cases of chronic cholecystitis.Results The expression of integrin α5 β1 in71.9 % cases of gallbladder carcinoma and 13.5 % cases of chronic cholecystitis was weaker than in the surrounding normal cholecystic mocusa. The positive rate of integrin α5 β1 was lower in poorly differentiated carcinoma group than in well differentiated group (P＜0.05). The positive rate of integrin α5 β1 was lower in metastatic carcinoma group than in non-metastatic group (P＜0.05). the two-year survival rate was higher in integrin α5 β1 positive group (32.5%) than in negative group (11.3 %, P＜0.05).Conclusion The weak or loss expression of integrin α5 β1 was related with differentiation and metastasis of gallbladder carcinoma. The expression of integrin α5 β1 might have prognostic value.

　　【Key words】 Gallbladder adenocarcinoma;　Integrinα5 β1;　Immunohistochemistry

　　膽囊癌發病率逐年升高，占膽道系統惡性腫瘤的64.7%。我們應用免疫組織化學方法檢測57例膽囊腺癌石蠟包埋標本中粘附分子整合素(integrin)α5β1的表達并探討其意義。

　　對象和方法

　　1.病例選擇：1988～1994年上海醫科大學附屬華山醫院和中山醫院手術切除的原發性膽囊癌病例標本57例，其中男22例，女35例，年齡36～81歲，平均56歲。按1991年WHO病理分類標準，57例均為膽囊腺癌，其中高分化癌18例，分化中等癌26例，分化差的癌13例。依據1987年UICC的膽囊癌TNM分期標準：T1期19例，T2期15例，T3期17例，T4期6例。57例中有37例(64.9%)合并有膽囊結石。取同期37例慢性膽囊炎的標本作為對照。

　　2.標本制備及免疫組化染色：兔抗人整合素α5 β1多抗為Sigma公司產品，羊抗兔IgG與兔PAP試劑為Vecter實驗室產品。標本經福馬林固定、石蠟包埋、連續切取2張5μm厚切片，1張作常規HE染色外，另1張用于檢測整合素α5 β1表達。免疫組化染色采用PAP法。

　　3.整合素α5 β1染色結果判定標準：按腫瘤細胞著色強度及陽性細胞分布范圍分為4個等級：無細胞著色(-)；10%～30%細胞呈弱、中等強度陽性反應(+)；30%細胞呈強陽性反應或30%～60%細胞呈弱、中等強度陽性反應()；＞60%細胞呈強陽性反應()。

　　4.統計學方法：免疫反應結果及其臨床病理參數的關系采用χ2檢驗，生存率計算使用壽命表法，不同分組間生存率差異使用時序檢驗。

　　結果

　　1. 整合素α5 β1表達與膽囊癌臨床病理學特征的關系：整合素α5β1的表達慢性膽囊炎和癌旁正常膽囊腺上皮整合素α5 β1多呈強陽性反應，其主要分布于腺上皮細胞的細胞膜及外周胞漿。而在57例膽囊腺癌組織中有41例(71.9%)整合素α5 β1呈陰性或不同程度表達減弱，在同一個病例，瘤細胞整合素α5β1的表達隨其浸潤的深度而不同，特別是侵入肌層或漿膜層的瘤細胞多趨于明顯減弱或消失。整合素α5β1表達與腫瘤的分化程度呈正比，即分化差時整合素α5 β1的表達趨于減少。分化好組整合素α5β1表達各級例數為2、1、3、12；分化中等組整合素α5 β1表達-～各級的例數分別為11、5、7、3；分化差組整合素α5β1表達-～各級的例數分別為10、1、1、1。3組比較，差異有顯著性(P＜0.05)。此外，整合素α5β1的表達明顯減少者臨床趨向于有淋巴結轉移。淋巴結轉移組整合素α5β1表達-～各級的例數分別為4、0、1、1；無淋巴結轉移組整合素α5β1表達-～各級的例數分別為19、7、11、16。兩組比較，差異有顯著性(P＜0.05)。

　　2.整合素α5 β1表達與膽囊腺癌預后的關系　45例膽囊癌病人獲得術后隨訪，隨訪率為78.5%，患者生存時間為3個月～6年，除去由于術后并發癥生存少于6個月的病例，整合素α5β1的表達減少組平均生存期7個月，無表達減少組為17個月。Logrank檢驗顯示兩者的生存率差異有顯著性(P＜0.05)。

　　討論

　　膽囊癌的生物學特性是多呈浸潤性生長，局部轉移早，患者的預后差。本實驗結果發現，57例膽囊癌患者2年中77.8%的病人出現轉移，總的2年生存率僅為22.2%。腫瘤局部的浸潤程度與預后呈負相關，T4期2年生存率為0%。整合素是由α、β兩條多肽鏈經非共價鍵連接而成的異二聚體，主要介導細胞與基質、細胞與細胞之間的相互作用。兩條鏈均有較長的細胞外片段、跨膜區和較短的細胞內片段。細胞外片段含配體的結合位點、與調節因子作用的功能區和Ca2+結合區。細胞內片段則通過actinin、vinculin、talin、actin等小分子與細胞骨架相連。各種整合素的結構十分相似，大多數整合素細胞外配體結合部位能識別RGD(精-甘-門冬氨酸)三肽序列，并與含有RGD的多種ECM成分結合。以往研究顯示細胞惡變后，瘤細胞表面的整合素表達有所改變，這種變化與腫瘤細胞的侵襲性及轉移密切相關［1，2］。但各種整合素在不同的腫瘤中表現不同，在同一腫瘤的不同部分表現也不同。如侵襲性強的黑色素瘤細胞表面表達β3。在黑色素瘤侵襲轉移時α6亞單位表達減少［3］。Feldman等［4］在對小細胞肺癌的研究中發現整合素α5β1 mRNA表達陰性與腫瘤的復發相關。Zutter等［5］發現整合素α5β1在乳腺癌中的表達與腫瘤分化有關。

　　本研究結果顯示，71.9%的膽囊癌組織中整合素α5 β1表達減少、丟失，而非腫瘤的膽囊組織只有14.3%表達減少。整合素α5β1主要分布于腫瘤淺表部位的瘤細胞，而浸潤膽囊壁肌層的癌細胞表達明顯減少，整合素α5β1的表達與膽囊癌組織學分級和淋巴結轉移有關，提示整合素α5β1是分化好、腫瘤無浸潤轉移的標志物。本研究顯示大多數病例腫瘤細胞整合素α5β1的表達均有不同程度的減少或消失，腫瘤細胞表面粘附因子的缺乏可能部分解釋膽囊癌易于局部浸潤和早期轉移的特點。手術標本中腫瘤細胞整合素α5β1的表達可以作為判斷患者預后的一個指標。

　　參考文獻

　　［1］Condic Ml, letowneau PC. Ligand-induced changes in integrin expression regulate neuronal adhesion and neurite outgrowth. Nature, 1997,389:852-856.

　　［2］Hangan D, Morris Vl, Boeters L, et al. An epitope in VLA-6(alpha6 beta1) integrin involved in migration but not adhesion is required for extravasation of murine melanoma B16F1 cells in liver. Cancer Res, 1997,57:3812-3817.

　　［3］Maemura M, Akiyama SK, Woods VJ, et al. Expression and ligand binding of alpha 2 beta 1 integrin on breast carcinoma cells. Clin Exp Metastasis, 1995,13:223-235.

　　［4］Feldman LE, Shin KC, Natale RB, et al. Beta 1 integrin expression on human small cell lung cancer cells. Cancer Res, 1991, 51:1065-1070.

　　［5］Zutter MM, Mazoujian G, Santoro SA, et al. Decreased expression of integrin adhesive protein receptors in adenocarcinoma of the breast. Am J Pathol,1990,137:863-870.